一體式超聲波破碎儀對(duì)大腸桿菌實(shí)驗(yàn)的幫助

更新時(shí)間：2021-11-19瀏覽：1577次

　　一體式超聲波破碎儀用于多種動(dòng)植物、病毒、細(xì)胞、細(xì)菌及組織的破碎，同時(shí)可用來乳化、分離、勻化、提取、消泡、清晰、納米材料的制備、分散及加速化學(xué)反應(yīng)等。該設(shè)備被廣泛用于生物學(xué)、微生物學(xué)、物理學(xué)、動(dòng)物學(xué)、農(nóng)學(xué)、制藥、化工、污水處理、納米材料等領(lǐng)域,也可用于產(chǎn)生波提取、超聲波材料制備、超聲波萃取、超聲波乳化等。

　　破碎大腸桿菌用于提取表達(dá)外源蛋白，在使用一體式超聲波破碎儀之前，用PBS懸浮，然后再破碎效果較好，其作用還是很明顯的，對(duì)其他的一些細(xì)菌同樣起作用，比如鏈霉菌。

　　細(xì)菌沉淀直接加樣品1 buffer，再加5μl的巰基乙醇，混勻，離心，煮沸10min，直接上樣，染色脫色步驟：

　　將膠放入適量的染色液微波爐里加熱1min(下次適當(dāng)補(bǔ)點(diǎn)醋酸即可),將染色液換成大量的水(自來水即可)在微波爐煮10min就可以。在表達(dá)重組蛋白后用超聲波破碎細(xì)胞，采用冰浴，400w，破2s停1s，但是不一會(huì)就產(chǎn)生大量泡沫，影響了破碎功率，pbs和tris緩沖液都是這樣，最后都是破碎不*，而蛋白就在這些未破碎的細(xì)胞中。

　　相關(guān)問題探討：

　　1.試驗(yàn)中產(chǎn)生氣泡：因?yàn)樘筋^位置沒放好。超聲波破碎儀探頭一定要接近底部約1cm。功率根據(jù)儀器不同會(huì)有所不同，但可通過觀察液面，有波動(dòng)但不要太劇烈就好。

　　2.破3s停10s，破碎20-30個(gè)循環(huán)觀察效果。

　　3.探頭位置擺放要注意，聽聲音如果不對(duì)的話就要及時(shí)調(diào)整。另外可從菌濃度方面考慮。在使用超聲波破碎時(shí)試著加大體積,振幅最好不要超過60%。

　　4.嘗試超8s停8s,對(duì)有些菌體蛋白來說，通常方法很難散熱，導(dǎo)致蛋白變性產(chǎn)生氣泡，可停頓時(shí)間稍長(zhǎng)一些，這種情況多見于包涵體形式的蛋白。如果換用一體式超聲波破碎儀來進(jìn)行工作，由于熱耗較小，停頓周期可適當(dāng)減小。